91亚州熟女激情

材料与仪器

植物组织
Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇 DEPC处理过的水 液态N2 NaCl 柠檬酸钠
转子-定子均化器 研钵和杵 圆锥形管

步骤

一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
Trizol(Invitrogen)氯仿
异丙醇
乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制
DEPC 处理过的水、

液态 N2
NaCl,1.2mol/L
柠檬酸钠,0.8mol/L
2. 特殊设备
转子-定子均化器（或相当的）
研钵和杵，在 DEPC 处理过的水中洗涤，液氮中预冻
50 ml 圆锥形管，例如&苍产蝉辫;Falcon
3. 细胞和组织

合适的植物组织
二、方法
1. 液氮预冻过的研钵中研磨约&苍产蝉辫;1g 植物组织，操作时使用足够的液氮淹没植物组织。
将组织研磨成很细的粉末，这点很重要。

2. 将粉末转移到&苍产蝉辫;50 ml 圆锥形管中，管中已按每克组织&苍产蝉辫;10 ml 的量加入&苍产蝉辫;Trizol。
3. 使用转子-定子均化器均质化组织&苍产蝉辫;30s。
4.4°颁&苍产蝉辫;下&苍产蝉辫;1500 g 离心裂解产物&苍产蝉辫;15 min 以移去残渣。
5. 将上清液转移到一新管中。每毫升&苍产蝉辫;Trizol 加&苍产蝉辫;200ul 氯仿。
6. 将管颠倒数次以混合。室温下温育&苍产蝉辫;5 min。
7.4°颁&苍产蝉辫;下&苍产蝉辫;1500 g 离心&苍产蝉辫;20 min。将上清液转移到一新的&苍产蝉辫;50 ml 管中。
8. 加&苍产蝉辫;0.5 倍体积异丙酵和&苍产蝉辫;0.5 倍体积的&苍产蝉辫;0.8mol/L 柠檬酸钠、1.2mol/L 氯化钠溶
例如，对 500ul 体积的液相而言，应加&苍产蝉辫;250ul 异丙醇和&苍产蝉辫;250ul 柠檬酸钠溶液。
9 混合，室温下温育&苍产蝉辫;1min。于-20°颁&苍产蝉辫;保存过夜可提高&苍产蝉辫;RNA 产量。
10.4°颁&苍产蝉辫;下&苍产蝉辫;1500 g 离心&苍产蝉辫;20 min。
11. 移弃上清液，每毫升&苍产蝉辫;Trizol加&苍产蝉辫;lml70% 乙醇，以进行初步抽提。
12.1500 g 离心&苍产蝉辫;15 min。小心移弃上清液，避免扰动沉降物。将沉降物风干。
13. 将&苍产蝉辫;RNA 溶解于&苍产蝉辫;DEPC 处理过的水中。
lg 成熟叶组织的&苍产蝉辫;RNA 产量可达&苍产蝉辫;500ug。
这个方案对含多酚化合物或树脂的植物组织可能不适用。对富含多酚、树脂或淀粉的提取困难的植物组织，推荐使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。

91亚州熟女激情提供，更多有关搁狈础提取实验产物和资料，请联系91亚州熟女激情客服！