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一、超滤离心管注意事项与技巧

1. MWCO选择：选择MWCO应为目标分子大小的 1/3 到 1/2。例如，浓缩100 kDa的蛋白，最好选择30-50 kDa的MWCO。

2. 离心力是关键：严禁超过说明书标注的最大离心力！过高的离心力会压缩膜结构，导致不可逆的损坏和通量下降。

3. 避免膜干燥：在任何时候（包括预处理后等待加样的短暂时间）都不要让膜变干，干燥会测辞苍驳箩颈耻性损坏膜。

4. 处理复杂样品：对于高粘度（如细胞裂解液）、高盐或含有脂质的样品，容易发生膜堵塞。可通过预先稀释样品、间歇式离心（离心5分钟，混匀再离心）或选择低吸附材质的膜（如PES膜比纤维素膜更耐污染）来改善。

5. 减少非特异性吸附：对于低浓度或珍贵的蛋白样品，可用含0.1% BSA或Tween-20的缓冲液预处理膜，以封闭膜的吸附位点，预处理后需用目的缓冲液再润洗一次。

6. 检查膜完整性：如果怀疑膜已破损，可加入一种已知分子量的染料（如蓝葡聚糖2000）离心，观察滤液中是否有染料漏出。

二、超滤离心管常见问题解答 (FAQ)

Q1: 离心速度很慢，甚至没有滤液产生？

原因：膜发生堵塞。

解决方案：对样品进行预处理（过滤或离心）；稀释样品；尝试“间歇离心"模式；检查离心力是否设置正确。

Q2: 目标蛋白回收率低？

原因：非特异性吸附在膜或管壁上；膜被刺破；蛋白沉淀。

解决方案：使用低吸附材质的超滤管；用BSA或Tween进行预处理；回收时充分吹打；确保操作过程中膜未被损坏；优化缓冲条件（如添加温和还原剂）。

Q3: 滤液中有我的目标蛋白（泄露）？

原因：选择了MWCO过大的超滤管；膜破损。

解决方案：更换更小MWCO的超滤管；进行膜完整性测试。

Q4: 浓缩后样品体积远大于预期？

原因：样品具有高粘度，膜上截留的液体无法被飞补苍辩耻补苍离心下去。

解决方案：适当延长离心时间或稍微提高离心力（在允许范围内）；回收时采用倒扣离心法。

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